胚胎移植技术是把优秀母畜进行超数排卵处理,并经配种后产生更多的优质胚胎,然后利用手术的方法移植到其他同类与采胚母畜同时发情未经配种的母畜子宫内,即人们常说的"借腹怀胎",该方法是加速良种扩繁的一种有效途径.但胚胎移植生物显微镜技术科技含量高,投资成本大,使该技术在国内畜牧良种繁育方面应用力度不大,移植妊娠率相对不高,制约了畜牧良种繁育推广和畜牧业快速发展.
陕西省布尔羊良种繁育中心从1998年开始,连续引进泰国、澳大利亚、南非等国外胚胎生物工程专家,与西农大专家合作开展山羊胚胎移植上千例,取得了很好的成果.从供体和受体的选择,供体的超排,受体同期化发情处理,胚胎回收、冲洗、鉴定,受体移植,受体羊的饲养等方面做了深入研究,总结出提高山羊胚胎移植成功率的主要因素.
选择优秀的供体和受体
供体 选择表现型好、生产水平高、遗传性稳定、体质健康、发情周期正常、无生殖道疾病、有1胎~2胎正常繁殖史的2岁~5岁青壮年羊做供体.
受体 要求体形大、无生殖道疾病、产奶量高、哺乳力强的空怀母羊为受体,受体羊年龄2岁~5岁且有1胎~2胎正常繁殖史.供体和受体羊的比例一般为1∶10~1∶12为宜.
加强供体和受体羊的饲养管理
供体和受体羊在手术前3个月~4个月必须全部选留到位,并做好疫病的预防接种及必要的疫病监测及驱虫等工作.从术前2个月加强饲养,将日粮中的蛋白质逐渐提高到20%~30%,要求羊身体健康,中上等膘情,防止过肥或过瘦.供体羊特别在处理期间及受体羊胚移后不能突然改变饲养环境、饲养方式及饲养标准,避免长途运输、意外惊吓等应激影响导致羊不排卵、胚胎退化及死亡,影响移植受胎率.
选择适宜的胚胎移植季节
山羊胚胎移植最佳适宜的季节为8月~10月.7月羊处于发情初期,出现发情不排卵的比率较高,11月移植所产生的羔羊在次年4月其成活率及生长速度较低.应避开最热和最冷的季节,气温高于32℃,移植成功率较低.另外,阴雨天对移植成功率也有一定影响,应尽量避开.
使用最佳药品,准确把握剂量
胚胎移植技术在国内运用规模尚小,没有专门生产胚胎移植药品的厂家,目前国内使用的胚胎移植药品大部分都是科研单位自己研制,没有大量应用临床实践.选择进口药物释放性能好,效价稳定,笔者在胚胎移植过程中,多年使用进口硅胶阴道栓,其操作方法简单,处理效果好,受到国内专家好评.笔者总结出胚胎移植采用21天药物处理程序,在第9天换栓1次,注射加拿大生产的FSH(Foltropin-r),剂量为200毫克~300毫克为宜,臂部肌肉分4天8次递减注射,PMSG剂量以200IU为宜,受体同期发情利用率可达87.7%,撤栓时间受体应比供体早撤栓12小时.供体羊注射PMSG剂量大则产生的未受精卵多,发情持续时间长.
做好供体羊配种及受体羊试情记录
发情测定以供受体羊开始接受爬跨时间生物显微镜到拒绝接受爬跨时间为准,以6小时~8小时进行1次测情,一般用结扎输精管后3个月的试情公羊测情,供体配种采用人工授精与公羊本交相结合的方式进行,间隔6小时配种1次,胚胎有效利用率为99.8%,从发情开始至发束为止,一定要做好详细的登记.
抓好胚胎移植术前的消毒工作
手术前对手术器械进行高压(15磅压力30分钟)、干热(每小时220℃)灭菌,场地用紫外线照射30分钟,喷洒消毒剂进行手术场地及环境消毒,手术过程做到无菌操作.手术前受体禁食24小时,限量饮水,以防止手术前腹压过大,造成手术困难和羊生殖道的损伤.
选择正确的冲胚方法
供体采胚多采用手术冲胚法进行,子宫角采集胚胎应于配种后6天~6天半进行,输卵管冲胚法在配种后2天~3天进行;麻醉以国产药品846合剂肌肉注射进行全身麻醉,同时准备国产速醒灵解麻药品进行解救以防意外;手术部位利用电动剪进行剪毛,5%的碘酊消毒,切口应在乳房前腹中线两侧2厘米~3厘米处手术切口,以提高羊可手术次数,创口以3厘米~4厘米为宜;当摸到子宫角或卵巢后不要强抓,用食指和中指轻轻夹住子宫角或输卵管,缓慢牵引出切口外,不可用力过大或触压卵巢;进行子宫角冲胚,冲胚液以20毫升~30毫升为宜,冲胚管(进口)气囊注入空气为3毫升~4毫升;冲洗干净手术部位的血凝块,向腹腔内注入含青链霉素的温热生理盐水250毫升~500毫升,将子宫角或输卵管完全还纳腹腔后,检查腹腔有无异物,然后进行腹膜缝合,依次为肌肉、皮肤缝合,皮肤涂红霉素软膏.
胚胎质量鉴定
将冲出的胚胎倒入检卵皿内,在显微镜下进行检查,评定等级,按其质量分为A、B、C三级,将C级胚胎及未受精卵、死胚、变性胚胎等不可用胚胎弃掉.一般根据受体羊黄体发育程度进行1枚~3枚移植.尽量将两枚胚胎同时移植入有黄体的同侧子宫角内.据测定,其胚胎成活率为70.5%,明显高于移植1枚的成活率(62%).
胚胎质量与移植方法
将胚龄为6天~6天半胚胎移入同步发情±12小时(9.74±2.85)的受体子宫角内,此时大多为早期囊胚或囊胚,其受胎率及产羔率也较高,桑椹胚受胎率52.6%(81/51),产羔率85.6%(101/118);早期囊胚受胎率59.4%(19/32);产羔率88.5%(23/26);扩张囊胚的受胎率66.2%(43/65),产羔率78.3%(65/83);囊胚受胎率57.7%(45/78),产羔率98.5%(58/59);孵化胚受胎率52.2%(24/26),产羔率81.8%(27/33).由此可见,胚胎质量的好坏,对受胎率影响很大.采用腹腔镜进行移植,其特点是创口小,移植速度快,术后感染率低,一般手术熟练者移植1只需1分半钟~3分钟,每天可移植120只~150只,鲜胚妊娠率为60%~80%,术后感染率为5%以下,可以有效地节约时间,提高受胎率.
饲养管理与妊娠诊断
由于移植后的受体羊身价倍增,应加生物显微镜强饲养管理,给予营养丰富的饲草饲料,避免因惊吓、急赶、突然改变饲养环境、喂冰冻饲料及饮水等引起的应激反应造成胚胎早期死亡和胚移羊中后期流产,应加强饲养管理;利用B超仪器进行早期诊断,对怀孕胚胎移植羊按移植时间、批次以35只为单位组群,安排责任心强的人员管护饲养,每天检查1次~2次伤口,发现伤口感染尽早处理.移植后两个情期再进行妊娠诊断:一般以2个情期未返情或用试情羊放入测情进行鉴定,借助超声波扫描仪进行确诊,及时处理空怀羊,给怀孕羊补充胡萝卜等富含维生素A、D、E的饲草饲料,饲喂全价饲料,补充钙、磷、铁、硒等矿物质微量元素.
综上所述,胚胎移植技术环节多,程序复杂,关键技术要求严格,抓好每个环节都很重要,要想取得良好的移植效果,应具备技术过硬的专业队伍和责任心强的管理人员,才能使胚胎移植成功率达到更高的水平.
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